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Technical articles賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀是一款高效能的基因檢測平臺,擁有強大的檢測通量和靈敏度,滿足不同領域的研究和檢測需求。其特點包括:
96孔板高通量設計:一次實驗能夠處理96個樣本,適合高通量篩選、臨床診斷及大規(guī)模基因表達檢測。
五通道熒光檢測系統(tǒng):配備五個獨立熒光檢測通道,允許用戶進行多重PCR反應,一次實驗中同時檢測多個靶標基因,大大提升實驗效率。
快速升降溫技術:采用精確的熱循環(huán)系統(tǒng),溫控精度高,能夠顯著縮短PCR循環(huán)時間,確保實驗結果的穩(wěn)定性和重現性。
實時數據監(jiān)控與分析:配套的軟件可以進行實時熒光信號監(jiān)控,提供即時數據分析和結果可視化,極大地方便了實驗進程中的決策。
高度靈活的實驗設置:支持靈活的程序編排,用戶可以根據實驗需求自由設置溫度、時間及循環(huán)參數,適用于不同類型的PCR實驗。
CFX96在多個領域有著廣泛的應用,適應不同的科研與臨床需求:
基因表達定量分析:可用于研究基因的相對或絕對表達水平,適用于功能基因研究及藥物研發(fā)中的靶點篩選。
病原體檢測:在臨床上廣泛用于病毒、細菌等病原微生物的快速檢測,包括新興傳染病的診斷及防控。
SNP基因分型:能夠精確檢測單核苷酸多態(tài)性,用于遺傳學研究和藥物基因組學中的個性化醫(yī)療方案開發(fā)。
基因突變分析:通過特異性引物和探針設計,可檢測基因突變點,尤其適合癌癥突變研究和遺傳病檢測。
食品與環(huán)境安全檢測:適用于轉基因食品檢測、環(huán)境樣本中的微生物監(jiān)控等領域。
樣本準備:從生物樣本中提取DNA或RNA,隨后進行反轉錄(如果是RNA樣品),以制備cDNA。準備好含有引物、探針及熒光染料的PCR反應混合物。
樣本加載:將PCR反應混合物分裝至96孔板中,密封光學封板以避免污染。
實驗設置:在CFX96的控制軟件中設置好PCR反應條件,包括變性、退火、延伸等步驟的時間和溫度。選擇合適的熒光檢測通道。
實驗運行與監(jiān)控:啟動儀器,系統(tǒng)會實時監(jiān)控熒光信號的變化,用戶可以隨時查看擴增曲線和Ct值。
結果分析與導出:實驗完成后,利用軟件自動生成標準曲線和Ct值報告,分析基因表達或病原體載量。
賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀的標準貨號為1855195。用戶在采購時需根據實驗需求選擇適合的配置,并確認具體貨號。
賽默飛CFX96的核心工作原理是基于實時熒光定量PCR(qPCR)。每個PCR反應循環(huán)中,模板DNA經歷變性、退火和延伸三個步驟,DNA的擴增伴隨著熒光染料的結合。熒光信號在每個循環(huán)中逐漸增強,儀器通過內置的光電檢測器實時捕捉熒光信號,生成擴增曲線并確定Ct值(Cycle threshold)。Ct值越低,說明樣品中靶標基因的初始濃度越高。通過與標準曲線對比,能夠定量分析樣本中的DNA或RNA濃度。
引物與探針設計:確保引物和探針的設計特異性高、退火溫度匹配,避免非特異性擴增,提升實驗可靠性。
反應體系優(yōu)化:針對不同實驗體系,優(yōu)化Mg2+、dNTPs、Taq酶等反應物的濃度,確保最佳擴增效率。
標準曲線構建:使用已知濃度的標準品建立標準曲線,確保實驗定量分析的準確性。
防止交叉污染:確保實驗操作在無菌條件下進行,特別是在樣本裝載和光學封板步驟,避免氣溶膠污染。
數據分析與結果驗證:實時監(jiān)測數據的變化,分析結果時注意樣本中的背景熒光干擾,必要時使用多次重復實驗確保數據可靠性。
檢測通量:一次最多可處理96個樣本,適合大規(guī)模實驗和高通量分析。
熒光檢測通道:五通道光學系統(tǒng),能夠同時監(jiān)測多種熒光信號,用于多重PCR實驗中的靶標基因檢測。
靈敏度:檢測靈敏度高,可檢測單拷貝水平的DNA或RNA樣本,適合低豐度基因檢測需求。
動態(tài)范圍:寬廣的線性動態(tài)范圍,通常在10^1至10^9拷貝之間,保證了基因表達的高精度定量。
溫控性能:CFX96的溫控系統(tǒng)精度為±0.2℃,并具有良好的孔間溫度均一性,確保所有樣本的反應一致性。
擴增速度:通過快速循環(huán)技術,可以在較短時間內完成一次完整的PCR實驗,提升實驗室的工作效率。
賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀憑借其高精度、快速、靈活的實驗操作能力,成為生命科學研究、醫(yī)學檢測和基因組學研究中的工具。其多通道檢測、高靈敏度與數據自動化分析功能,為科研工作者提供了理想的實驗平臺,助力科研與臨床的快速發(fā)展。